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諾如病毒G1型RT-PCR試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/3/5      點(diǎn)擊次數(shù):276

產(chǎn)品及特點(diǎn):

諾如病毒Norwalk Virus是單股正鏈 RNA 病毒屬于人類杯狀病毒屬,是一種引起非細(xì)菌性急性腸胃炎的病毒,如諾病毒感染性強(qiáng),以腸道傳播為主,通過(guò)口-糞傳播,以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個(gè)基因群,其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品,采用RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)疑似感染動(dòng)物血清或組織中的諾如病毒 G1 型。它具有下列特點(diǎn):

1.       即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。

2.      提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

3.      產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)諾如病毒 G1 RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟除此之外的其它病毒RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4.      RT-PCR mix 中含上樣染料,擴(kuò)增反應(yīng)后可以直接上樣電泳。

5.      本產(chǎn)品足夠5020μL體系的PCR反應(yīng)。

6.      本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn),不能用于定量。

       7.      本產(chǎn)品只能用于科研。


規(guī)格及成分:

 

A

B

C

D

E

使用手冊(cè)


注:為避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供專一的核酸片段作為陽(yáng)性對(duì)照。


運(yùn)輸及保存:

低溫運(yùn)輸,-20保存,保存期限為12個(gè)月。

自備試劑:樣品RNA


使用方法:

一、樣品DNA的制備

1.       如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng),多出的兩個(gè)中一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?span>10μL諾如病毒 G1 PCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E6拷貝/μL,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。

2.      用自選方法純化上述N+2個(gè)樣品的DNA。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置PCR反應(yīng)(20μL體系)

3.      標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的DNA樣品,額外增加的兩個(gè)管一個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照,另一個(gè)用于PCR陰性對(duì)照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:

成分/每管

樣品管

N+2個(gè)

PCR陰性對(duì)照

PCR陽(yáng)性對(duì)照

A

10 μL

10 μL

10 μL

D

2 μL

2 μL

2 μL

制備的N+2個(gè)DNA樣品

7 μL

-

-

C

-

7 μL

-

E

-

-

7 μL

B

1 μL

1 μL

1 μL










4.      上機(jī)進(jìn)行PCRPCR反應(yīng)參數(shù)為:

過(guò)程

溫度

時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄

50

20 min

預(yù)變性

95℃

10 min

PCR反應(yīng)

45個(gè)循環(huán))

95℃

30 sec

55

60 sec

72

60 sec

延伸

72

7 min










三、電泳分析

5.       5-10uL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)瓊脂糖電泳,檢測(cè)擴(kuò)增效果,由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短,建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

6.      陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為220bp左右。如果兩個(gè)陰性對(duì)照(樣品制備陰性對(duì)照或PCR陰性對(duì)照)有此擴(kuò)增產(chǎn)物,說(shuō)明環(huán)境污染,則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效,不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7.      如果所有樣品和PCR陽(yáng)性對(duì)照均無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物,則說(shuō)明有系統(tǒng)性的問(wèn)題(試劑、設(shè)備、程序、操作等),需要重復(fù)并排查原因。

       8.     如果沒(méi)有上述兩種情況,則實(shí)驗(yàn)有效,可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽(yáng)性,無(wú)則判定為陰性。


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